摘要
选取2018年10月—2021年10月厦门长庚医院收治的187例SAP患者，依据是否发生肝损伤分为肝损伤组和无肝损伤组。对比肝损伤组和无肝损伤组临床资料、TLR4和TRAF6 mRNA相对表达量。采用多因素Logistic逐步回归模型分析SAP患者发生肝损伤的相关因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合检测对SAP患者肝损伤发生的预测价值。
187例SAP患者并发肝损伤62例，未并发肝损伤125例。肝损伤组急性胰腺炎床旁严重度指数（BISAP）评分、脂肪酶、淀粉酶（AMY）、白细胞介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA相对表达量高于无肝损伤组（P <0.05）。多因素Logistic逐步回归分析结果显示：BISAP评分［O^R=2.892（95% CI：1.482，5.645）］、TLR4 mRNA ［O^R=3.334（95% CI：1.710，6.512）］、TRAF6 mRNA ［O^R=3.059（95% CI：1.567，5.970）］均为影响SAP患者肝损伤发生的危险因素（P <0.05）。ROC曲线分析结果显示，外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合预测SAP患者肝损伤发生的敏感性分别为80.65%（95% CI：0.621，0.872）、77.42%（95% CI：0.546，0.824）、75.81%（95% CI：0.534，0.819），特异性分别为73.60%（95% CI：0.503，0.796）、80.80%（95% CI：0.617，0.863）、99.20%（95% CI：0.725，0.998），曲线下面积分别为0.792（95% CI：0.727，0.848）、0.824（95% CI：0.762，0.876）、0.856（95% CI：0.797，0.903）。
急性胰腺炎（acute pancreatitis, AP）是临床常见的急腹症之一，临床特点主要为急性上腹痛、淀粉酶（Amylase, AMY）升高
Toll样受体4（Toll-like receptor 4, TLR4）为一种分子模式识别受体，可通过结合特异性配体激活核转录因子-κB（nuclear factor-κB, NF-κB）信号分级，并上调下游诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS），进而形成TLR4/iNOS信号通路，参与疾病的发生、发
选取2018年10月—2021年10月厦门长庚医院收治的187例SAP患者。其中，男性124例、女性63例；年龄23～72岁，平均（44.79±9.86）岁；体质量指数（body mass index, BMI）18.62～26.74 kg/
采集患者入院24 h内空腹（禁食≥ 12 h）外周血3 mL，通过Ficoll密度梯度离心法分离患者外周血单个核细胞，TRIzol法提取RNA（试剂盒购自北京奥秘佳得医药科技有限公司），逆转录为cDNA。TLR4、TRAF6及内参基因β-actin正反向引物均由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成。TLR4正向引物：5'-GTTACGTAGTCACATGATCATG-3'，反向引物：5'-GACATGATCGATCCTAGTGATG-3'，长度123 bp；TRAF6正向引物：5'-TGACCTAGATCGTACGTACTG-3'，反向引物：5'-AGCATTAGAGCTGTACTGACT-3'，长度116 bp；β-actin正向引物：5'-GTCATGATGCCTAGTAGGTTAC-3´，反向引物：5'-TATGATATACGATCGAAGTCGA-3´，长度125 bp；实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）反应条件：92 ℃预变性2 min；92 ℃变性12 s；63 ℃退火23s；75 ℃，延伸20 s，共41个循环。采用
收集影响SAP患者肝损伤发生的有关资料，主要包括性别、年龄、BMI、BISAP评分、是否合并基础疾病（高血压、糖尿病、高脂血症）、吸烟史、饮酒史、病因、白细胞（white blood cell, WBC）、血红蛋白（Hemoglobin, Hb）、血肌酐、血清脂肪酶、AMY、肌酸激酶、白细胞介素-6（Interleukin-6, IL-6）、C反应蛋白（C-reactive protein , CRP）、降钙素原（C-reactive protein, PCT）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）。
| 组别 | 饮酒史例（%） | WBC/（×1 | Hb/（g/L，x±s） | 病因 例（%） | 血肌酐（μmol/L，x±s） | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 高脂血性 | 胆源性 | 酒精性 | 其他 | |||||
| 无肝损伤组 | 43（34.40） | 9.61±4.03 | 98.84±22.59 | 28（22.40） | 59（47.20） | 23（18.40） | 15（12.00） | 91.13±10.85 |
| 肝损伤组 | 27（43.55） | 10.25±3.18 | 95.13±23.06 | 13（20.97） | 27（43.55） | 16（25.81） | 6（9.68） | 94.06±10.27 |
|
t / | 1.481 | 1.093 | 1.050 | 1.377 | 1.769 | |||
| P 值 | 0.224 | 0.276 | 0.295 | 0.241 | 0.079 | |||
| 组别 | 脂肪酶（u/L，x±s） | AMY（u/L，x±s） | 肌酸激酶（u/L，x±s） | IL-6（pg/mL，x±s） | CRP（mg/mL，x±s） | PCT（ng/L，x±s） | TNF-α（ng/mL，x±s） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 无肝损伤组 | 426.72±58.49 | 784.52±76.84 | 8.21±1.37 | 76.54±9.25 | 16.58±3.76 | 5.46±1.54 | 4.19±0.82 |
| 肝损伤组 | 503.42±62.75 | 815.43±85.21 | 8.64±1.53 | 80.45±10.32 | 18.23±3.92 | 6.13±1.75 | 4.51±0.87 |
|
t / | 8.239 | 2.497 | 1.943 | 2.618 | 2.785 | 2.675 | 2.462 |
| P 值 | 0.000 | 0.013 | 0.054 | 0.010 | 0.006 | 0.008 | 0.015 |
肝损伤组与无肝损伤组的性别构成、年龄、BMI、吸烟史、合并基础疾病、饮酒史、WBC、Hb、病因、血肌酐、肌酸激酶水平比较，经t 或
| 组别 | n | 男/女/例 | 年龄/（岁，x±s） | BMI/（kg/ | BISAP评分 （x±s） | 吸烟史例（%） | 合并基础疾病 例（%） | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 高血压 | 糖尿病 | 高脂血症 | |||||||
| 无肝损伤组 | 125 | 78/47 | 43.75±10.28 | 22.43±2.07 | 3.57±0.21 | 51（40.80） | 27（21.60） | 21（16.80） | 18（14.40） |
| 肝损伤组 | 62 | 46/16 | 46.89±11.32 | 22.15±2.21 | 4.06±0.34 | 32（51.61） | 13（20.97 | 10（16.13） | 7（11.29） |
|
t / | 2.580 | 1.901 | 0.851 | 12.126 | 1.963 | 0.010 | 0.013 | 0.346 | |
| P 值 | 0.108 | 0.059 | 0.396 | 0.000 | 0.161 | 0.921 | 0.908 | 0.556 | |
肝损伤组与无肝损伤组TLR4和TRAF6 mRNA相对表达量比较，经t 检验，差异均有统计学意义（P <0.05）；肝损伤组TLR4和TRAF6 mRNA相对表达量高于无肝损伤组。见
| 组别 | n | TLR4 mRNA | TRAF6 mRNA |
|---|---|---|---|
| 肝损伤组 | 62 | 3.12±0.63 | 2.81±0.57 |
| 无肝损伤组 | 125 | 1.83±0.41 | 1.76±0.39 |
| t 值 | 16.828 | 14.783 | |
| P 值 | 0.000 | 0.000 |
以SAP患者是否并发肝损伤为因变量（未发生= 0，发生= 1），以BISAP评分、脂肪酶、AMY、IL-6、CRP、PCT、TNF-α、TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA（赋值为实测值）为自变量，进行多因素Logistic逐步回归分析（α入=0.05，α出=0.10），结果显示：BISAP评分[O^R=2.892（95% CI：1.482，5.645）]、TLR4 mRNA [O^R=3.334（95% CI：1.710，6.512）]、TRAF6 mRNA [O^R=3.059（95% CI：1.567，5.970）]均为影响SAP患者肝损伤发生的危险因素（P <0.05）。见
| 自变量 | b | Sb | Wald | P 值 | O^R | 95% CI | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 下限 | 上限 | ||||||
| BISAP评分 | 1.062 | 0.425 | 6.244 | 0.008 | 2.892 | 1.482 | 5.645 |
| TLR4 mRNA | 1.205 | 0.382 | 9.951 | 0.002 | 3.334 | 1.710 | 6.512 |
| TRAF6 mRNA | 1.118 | 0.412 | 7.364 | 0.005 | 3.059 | 1.567 | 5.970 |
ROC曲线分析结果显示，外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合预测SAP患者肝损伤发生的敏感性分别为80.65%（95% CI：0.621，0.872）、77.42%（95% CI：0.546，0.824）、75.81%（95% CI：0.534，0.819），特异性分别为73.60%（95% CI：0.503，0.796）、80.80%（95% CI：0.617，0.863）、99.20%（95% CI：0.725，0.998），曲线下面积（area under curve, AUC）分别为0.792（95% CI：0.727，0.848）、0.824（95% CI：0.762，0.876）、0.856（95% CI：0.797，0.903）。见
| 指标 | 最佳截断值 | 敏感性/% | 95% CI | 特异性/% | 95% CI | AUC | 95% CI | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 下限 | 上限 | 下限 | 上限 | 下限 | 上限 | |||||
| TLR4 mRNA | 2.56 | 80.65 | 0.621 | 0.872 | 73.60 | 0.503 | 0.796 | 0.792 | 0.727 | 0.848 |
| TRAF6 mRNA | 2.31 | 77.42 | 0.546 | 0.824 | 80.80 | 0.617 | 0.863 | 0.824 | 0.762 | 0.876 |
| 联合 | - | 75.81 | 0.534 | 0.819 | 99.20 | 0.725 | 0.998 | 0.856 | 0.797 | 0.903 |
图1 外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合预测SAP患者肝损伤发生的ROC曲线
SAP患者胰酶激活异常，损害胰腺胰泡细胞，局部损伤产生过量活性氧、氧自由基，进而激活机体炎性介质、单核巨噬细胞，致使炎症级联扩增反应，导致全身炎症反应，加剧疾病进展，易造成多器官功能障碍综合征等并发症，加大治疗难度，影响患者预
本研究中，187例SAP患者并发肝损伤62例、未并发肝损伤125例。肝损伤组BISAP评分、脂肪酶、AMY、IL-6、CRP、PCT、TNF-α、TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA相对表达量高于无肝损伤组，并经多因素Logistic逐步回归分析结果显示，BISAP评分、TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA均为影响SAP患者肝损伤发生的相关因素。分析其原因可能为BISAP评分可反映胰腺损伤的严重程度，BISAP评分越高表明胰腺损伤越严重，可在一定程度上增加肝损伤的发生风
综上所述，外周血TLR4、TRAF6表达与SAP患者并发肝损伤有关，且外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA联合预测SAP患者发生肝损伤的效能较高。建议在临床上通过检测外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA相对表达量对SAP患者肝损伤发生情况进行评估。
参 考 文 献
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