摘要:

目的  采用改良分次酶消化法体外分离培养家兔肌腱干细胞，观察其生物学特性，并进行诱导分化及鉴定。方法  无菌条件下取出家兔髌腱组织，分别运用改良的分次酶消化法和酶消化后低密度稀释接种法进行分离、培养、传代，用倒置相差显微镜观察细胞形态特征并绘制两种方法的生长曲线，通过流式细胞鉴定仪检测肌腱干细胞表面抗原标志物的表达，取P3-P4代肌腱干细胞向成骨细胞、成软骨细胞诱导分化并鉴定。结果  改良的分次酶消化法较酶消化后低密度稀释接种法细胞增殖速度加快，形态均一，杂质细胞少。分离出的肌腱干细胞表面抗原标志CD90、CD44呈阳性，而CD34、CD14呈阴性，证实之前分离的细胞为肌腱干细胞。鉴定出肌腱干细胞具有向成骨细胞和成软骨细胞分化能力。结论  采用改良的分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞简单易行，肌腱干细胞生长及传代速度可观，活性良好，纯度较高。另外，肌腱干细胞的成功分离培养，也为肌腱相关疾病的研究开辟了一条新途径。

摘要:

目的  建立大鼠胫骨的骨癌痛模型，观察骨癌痛发生时脊髓背根神经节内主要组织相容复合物Ⅱ（MHCⅡ）的表达变化情况。方法  雌性SD大鼠33只，随机分为正常组（Naive组，n =9）、假手术组（Sham组，n =12）和骨癌痛组（骨癌痛组，n =12）。骨癌痛组右侧胫骨的骨髓腔内接种Walker 256乳腺癌细胞，Sham组注射相等体积的D-Hanks液。于手术前1天及手术后3、7、10和14 d使用von-Frey丝测定手术侧的机械缩爪阈值；于手术后14 d采集各组（n =9）的L3～L5的右侧背根神经节，每3只大鼠的背根神经节标本作为一组提取总的蛋白质，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MHCⅡ的变化情况；于手术后14 d多聚甲醛灌注Sham组（n =3）和骨癌痛组（n =3）大鼠，取L3～L5的右侧背根神经节制作冷冻切片，采用免疫荧光双标染色观察MHCⅡ的变化情况以及与神经元和卫星细胞的关系。结果  手术前各组大鼠的机械缩爪阈值，差异无统计学意义；骨癌痛组在骨癌痛模型建立7 d后较基础值显著降低，差异有统计学意义（P <0.05），且显著低于Naive组，差异有统计学意义（P <0.05）。免疫荧光染色显示MHCⅡ表达于背根神经节的卫星细胞；同时Western blot定量结果发现骨癌痛组的MHCⅡ表达水平显著高于Naive组，而Sham组变化差异无统计学意义。结论  骨癌痛大鼠背根神经节的MHCⅡ表达升高，可能参与骨癌痛的外周敏化。

摘要:

目的  探讨色胺酮抑制由胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）促肥大细胞增殖的药理机制，为色胺酮治疗肥大细胞相关过敏性皮炎提供理论依据。方法  在TSLP刺激人源肥大细胞系-1（HMC-1）细胞增殖的前提下，同步采用色胺酮处理增殖的细胞，观察对细胞增殖的影响和相关蛋白水平变化。噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度色胺酮处理对细胞活力的影响；溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平检测不同处理组细胞增殖情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测鼠双微体基因2（MDM2）、P53、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）剪切蛋白水平变化；实时荧光定量聚合酶链反应检测白细胞介素7受体α（IL-7Ra）和TSLPR mRNA的含量。结果  MTT比色法结果表明，色胺酮无细胞毒性；溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平的检测均显示色胺酮抑制TSLP刺激的肥大细胞增殖；色胺酮抑制TSLP刺激的HMC-1中MDM2蛋白表达水平，蛋白灰度分析比较差异有统计学意义；色胺酮处理后，HMC-1细胞中，P53蛋白和凋亡标志蛋白Caspase-3、PARP剪切蛋白水平升高，且蛋白灰度分析比较差异有统计学意义；TSLP上游调控蛋白IL-7Ra和TSLPR mRNA水平在色胺酮的作用下受到抑制。结论  色胺酮可抑制TSLP促肥大细胞增殖，对治疗肥大细胞相关过敏性皮炎有一定的潜力。

摘要:

目的  根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因片段质粒，纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法  利用构建的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因质粒Pris His MB-M3，转化至大肠埃希菌（E.coil）BL21（DE3）感受态细胞中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB-M3融合蛋白；将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔，获得NBVs M3多克隆抗体；蛋白免疫印迹检测（Western blot）蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果  SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示：25℃、IPTG浓度为0.3 mmol/L，诱导12 h，Pris His MB-M3融合蛋白表达量最高；在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体，Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论  成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3多克隆抗体，为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。

摘要:

目的  研究MicroRNA-219-5p（miR-219-5p）靶向E-钙黏蛋白（E-Cadherin）调控上皮间质转化（EMT）抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法  首先通过生物信息学方法，寻找与E-Cadherin结合特异性最好、稳定性强的miRNAs。在30例肝癌组织和20例癌旁肝组织中，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-Cadherin的表达水平；实时荧光定量PCR检测（qRT-PCR）miR-219-5p表达，分析两者之间的相关性。在高转移和低转移的肝癌细胞株中，qRT-PCR检测miR-219-5p表达，Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin表达。采用Lipofectamine 2000将miR-219-5p 模拟子（mimic）、抑制子（inhibitor）、阴性对照组（negative contral）转染到肝癌HepG2细胞系，qRT-PCR检测miR-219-5p表达，Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin的表达；Transwell方法检测miR-219-5p表达改变对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。结果  生物信息学发现miR-219-5p与E-Cadherin结合最稳定，且特异性最好。肝癌组织中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达，而癌旁组织中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达。高转移细胞株中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达而N-cadherin高表达，在低转移细胞株中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达而N-cadherin低表达（P <0.05）。miR-219-5p水平表达增高，引起E-Cadherin表达下调，N-cadherin高表达；miR-219-5p表达下调，可引起E-Cadherin表达上调，N-cadherin低表达（P <0.05）；HepG2-miR-219-5p 模拟子细胞株中侵袭细胞计数为（24±3）个/高倍镜视野，明显低于对照组细胞株（P <0.05）。结论  miRNA-219-5p可通过靶向结合E-Cadherin，调控EMT信号通路，抑制肝癌细胞的侵袭转移。

摘要:

目的  分析小剂量低分子肝素联合硫酸镁治疗重度子痫前期对血清和胎盘中病情相关分子的调节作用。方法  选取2012年7月-2014年7月于本院收治的重度子痫前期患者68例作为研究对象，随机分为观察组及对照组。对照组患者接受单纯硫酸镁治疗，观察组患者接受小剂量低分子肝素联合硫酸镁治疗，对比两组患者的血清及胎盘组织中激肽释放酶表达、妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）、妊娠特异性β1糖蛋白（SPI）、胎盘生长因子（PLGF）、人胎盘催乳素（HPL）水平、转化生长因子β1（TGF-β1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）及E选择素水平等差异。结果  观察组患者的治疗后血清及胎盘组织中激肽酶表达量均高于对照组患者，差异有统计学意义（P <0.05）；血清及胎盘组织中PAPP-A水平低于对照组患者，差异有统计学意义（P <0.05）；血清及胎盘组织中，TGF-β1水平高于对照组，VCAM-1及E选择素水平低于对照组患者，差异有统计学意义（P <0.05）。结论  重度子痫前期患者接受小剂量低分子肝素联合硫酸镁治疗，可以促进内源性激肽释放酶表达，降低妊娠期高血压相关预测因子水平，减弱细胞滋养细胞的浸润能力。

摘要:

目的  研究血清β2微球蛋白与2型糖尿病（T2DM）患者认知功能障碍的相关性。方法  选取2015年6月-2015年10月在唐山市工人医院内分泌科住院的T2DM患者186例为病例组，同期体检健康者150例为正常组，收集其人口学资料及临床检验指标。采用放射免疫定量分析方法检测血清β2-MG水平，应用可重复的成套神经心理状态测量量表对所有人认知功能进行评定。结果  ①与正常组比较，T2DM组患者血清β2-MG水平明显升高（P <0.01）；②与正常组比较，T2DM组RBANS量表即时记忆、视觉广度、言语功能、注意力、延迟记忆、总分降低（P <0.05）；③在T2DM患者中，与低β2-MG水平组比较，高β2-MG水平组即时记忆、视觉广度、言语功能、注意力、延迟记忆评分以及总分更低（P <0.05）；④在T2DM患者中，β2-MG水平与即刻记忆、视觉广度、言语功能、注意力、总分成负相关（P <0.05）。结论  血清β2-MG水平上升是T2DM患者出现认知功能降低的危险因素之一。

摘要:

目的  探讨超敏C反应蛋白（hs-CRP）、内皮抑素（ES）在糖尿病肢端坏疽早期病变（DG）中的诊断价值。方法  将106例2型糖尿病患者，按照是否出现糖尿病足分为单纯糖尿病组（DM组）和糖尿病肢端坏疽早期病变组（DG组），采用超敏乳胶增强散射比浊法测定hs-CRP，ELISA法测定ES，检测其在DG中的诊断价值。结果  DG组自主神经病变（DAN）、下肢动脉管病变（LEAD）、微量尿蛋白（MAU）、踝肱指数（ABI）、低密度脂蛋白（LDL-C）、hs-CRP、血管内皮生长因子（VEGF）、ES以及欧米诺变色开始时间、完全变色时间均高于DM组（P <0.05或P <0.01）；Spearman相关性分析发现，hs-CRP与DAN、LEAD、VEGF、ES、LDL-C呈正相关（r = 0.486、0.477、0.505、0.503和0.473，P <0.05），与ABI呈负相关（r =-0.488，P <0.05）；ES与DAN、LEAD、VEGF、hs-CRP呈负相关（r =-0.507，-0.501，-0.492和-0.508，P <0.05），与ABI呈负相关（r =0.497，P <0.05）；ES+hs-CRP诊断在敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确率及AUC均高于ES、hs-CRP单独诊断。结论  ES、hs-CRP与DG以及合并有自主神经病变具有明显相关性，ES联合hs-CRP对于DG具有较高的诊断价值。

摘要:

目的  探讨老年急性缺血性脑卒中患者血清中尿酸、总胆红素以及脂蛋白水平与其他因素的变化在急性缺血性脑卒中发生发展中的作用以及相关关系的综合性分析。方法  选取在2014年1月-2015年12月首次住院治疗的老年急性缺血性脑卒中患者114例（脑卒中组）。急性期24h空腹抽血测定其急性期尿酸、总胆红素、三酰甘油、血糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白B（ApoB）、载脂蛋白A1（ApoA1）、总胆固醇等水平，与同期健康体检者90例（对照组）进行比较。结果  急性缺血性脑卒中组体重指数（BMI）、尿酸、三酰甘油、血糖、低密度脂蛋白、ApoB/ApoA1、总胆固醇、收缩压、舒张压明显高于对照组（P <0.01）；病例组总胆红素和高密度脂蛋白低于对照组（P <0.01）；尿酸与BMI、三酰甘油、血糖、低密度脂蛋白、ApoB/ApoA1、舒张压呈显著正相关（P<0.01），尿酸与总胆红素和收缩压呈负相关（P <0.01）；总胆红素与高密度脂蛋白呈正相关（P <0.01），与尿酸、三酰甘油、血糖、低密度脂蛋白、ApoB/ApoA1、总胆固醇、收缩压以及舒张压呈负相关（P <0.01）；低密度脂蛋白与BMI、尿酸、血糖、ApoB/ApoA1、总胆固醇呈正相关（P <0.01），与年龄、三酰甘油、高密度脂蛋白呈负相关（P <0.01）；并且以上结果差异均有统计学意义（P <0.05）。结论  急性脑卒中患者尿酸、总胆红素以及脂蛋白水平的升高都是急性缺血性脑卒中的危险因素，并且这3个独立的危险因素与其他相关因素协同作用，在老年急性缺血性脑卒中发生发展中起到了非常重要的作用。

摘要:

目的  探讨新诊断2型糖尿病（T2DM）患者血清硫氧还蛋白（Trx）、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）水平与颈动脉粥样硬化（CAS）的相关性。方法  选取2014年2月-2015年11月于河北省唐山市工人医院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者160例作为病例组。根据颈动脉超声检查结果将患者分为T2DM伴CAS组（CAS组，n=65例）和T2DM不伴CAS组（NCAS组，n=95例）。同时从医院健康体检中心选取非糖尿病健康人群140例作为正常组。记录其年龄、性别、体重指数（BMI）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP），收集其临床检验结果，包括空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、糖化血红蛋白（HbA1C）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、同型半胱氨酸（Hcy），计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清Trx、TXNIP含量，采用胰岛素还原法检测血清Trx活性。结果  与正常组比较，T2DM患者FPG、HbA1c、HOMA-IR、Trx、TXNIP水平升高，Trx活性下降（均P <0.05）；T2DM患者CAS组较NCAS组年龄较大，FPG、HbA1c、SBP、Trx、TXNIP水平较高，Trx活性下降（均P <0.05）；在T2DM患者中，Trx与HbA1c呈正相关，TXNIP与HbA1c、HOMA-IR呈正相关，Trx活性与TXNIP呈负相关（均P <0.05）；在T2DM患者中，年龄、HbA1c、Trx、TXNIP及Trx活性为合并CAS的影响因素，其中年龄（■=1.134，P =0.032）、HbA1c（■=1.275，P =0.021）、Trx（■=1.532，P =0.015）、TXNIP（■=1.731，P = 0.005）为CAS发生的危险因素，而Trx活性（■=0.507，P =0.002）为CAS发生的保护因素。结论  新诊断T2DM患者血清Trx、TXNIP、Trx活性与其CAS相关，提示Trx系统可能参与了CAS的发生及发展。